Encapsulación del Factor de Crecimiento Epidérmico

María del Carmen Luzardo Lorenzo
Departamento de Bioquímica, Universidad de La Habana
March, 2017
 

Resumen

La capacidad inmunopotenciadora de las vesículas liposomales ha sido demostrada para numerosos antígenos de diferentes fuentes. No obstante, no existe un consenso en cuanto a la formulación liposomal óptima puesto que su capacidad adyuvante está influida por las características estructurales de las vesículas tales como la composición lipídica y el tamaño, así como su combinación con otros adyuvantes o moléculas co-estimuladoras. Además, se conoce muy poco acerca de los mecanismos por los cuales transita la adyuvanticidad liposomal por lo que, el empleo de liposomas como adyuvantes de antígenos poco inmunogénicos pudiera resultar de interés en el esclarecimiento del efecto potenciador de estos sistemas. En esta dirección, se seleccionó el EGFhr como antígeno modelo por cuanto debe resultar un débil inmunógeno para el ratón dada su elevada homología estructural con el EGF murino. La respuesta inmune obtenida contra el EGFhr ha sido ampliamente caracterizada en modelos animales y en humanos, con el empleo de adyuvantes convencionales. En este trabajo se estudió la encapsulación y retención del EGFhr por las vesículas liposomales constituidas por fosfatidilcolina de diferente naturaleza y colesterol, obtenidas mediante los procedimientos de congelación-descongelación y deshidratación-rehidratación. Estas vesículas se emplearon como adyuvantes del EGFhr, conjugado o no a la proteína transportadora P64k de Neisseria meningitidis, en ratones Balb/c y NMRI. Los principales resultados derivados de la caracterización de los liposomas que contenían EGFhr permitieron demostrar el mejor rendimiento de encapsulación y capacidad de retención de las vesículas de dipalmitoilfosfatidilcolina y colesterol obtenidas mediante deshidratación-rehidratación. El estudio de la respuesta inmune anti-EGFhr con el empleo de estas vesículas evidenció un efecto potenciador superior en comparación al obtenido con el hidróxido de aluminio. Con el empleo del EGFhr encapsulado en liposomas de la composición antes mencionada se lograron altos títulos de anticuerpos anti-EGFhr, la promoción de las subclases IgG2a e IgG2b, la inducción de respuestas de hipersensibilidad retardada y linfoproliferación, así como un incremento en la supervivencia frente al tumor ascítico de Ehrlich de los ratones inmunizados, aun en ausencia de la proteína transportadora P64k. Los liposomas constituidos por los fosfolípidos saturados dipalmitoilfosfatidilcolina y diestearoilfosfatidilcolina indujeron respuestas de anticuerpos anti-EGFhr cualitativamente superiores a las obtenidas con los liposomas de fosfatidilcolina de soya (insaturada) y con el hidróxido de aluminio en cuanto a los niveles totales de IgG y de las subclases IgG1, IgG2a e IgG2b, así como la capacidad de estos anticuerpos anti-EGFhr para inhibir la interacción del EGF con su receptor.