RESUMEN: Las enzimas proteolíticas –como la colagenasa, la tripsina y la pronasa E– son ampliamente utilizadas para disociar cardiomiocitos adultos. Existen evidencias de que el tratamiento enzimático puede alterar los canales iónicos. El objetivo de esta investigación fue comparar las características de la corriente de Ca2+ tipo L (ICaL) de cardiomiocitos de rata disociados con dos combinaciones enzimáticas: colagenasa más tripsina (C+T) y colagenasa más pronasa E (C+P). La densidad de ICaL (pA/pF) fue significativamente menor (~ 2 pA/pF) en los miocitos aislados con la combinación C+P. No obstante, el curso de su inactivación solo fue ligeramente afectado. La dependencia de la cinética de ICaL con el voltaje tampoco fue afectada por la combinación enzimática C+P. Nuestros resultados sugieren que, en comparación con C+T, el tratamiento enzimático con la combinación C+P puede reducir el número de canales funcionales (expresados) en el sarcolemma.

PALABRAS CLAVE: canal de calcio, cardiomiocitos, colagenasa, pronasa, tripsina.

ABSTRACT:  Proteolytic enzymes such as collagenase, trypsin and pronase E are widely used to acutely dissociate adult cardiomyocytes. There is some evidence that enzyme treatment can alter ionic channels. The aim of the present investigation was to compare the characteristics of the L-type Ca2+ current (ICaL) of rat ventricular cardiomyocytes dissociated with two enzyme combinations: collagenase + trypsin (C+T) and collagenase + pronase E (C+P). ICaL density (pA/pF) was significantly lower (~ 2 pA/pF) in myocytes isolated with the C+P combination. However, its inactivation time course was barely affected. As well, the voltage dependency of ICaL kinetics was not affected by the C+P treatment. Our results suggest that, compared to the C+T, treatment with the C+P enzyme combination could decrease the number of functional (expressed) channels in the sarcolemma.

KEYWORDS: calcium channel, cardiomyocytes, collagenase, pronase, trypsin